Estes cães grandes e poderosos têm um temperamento calmo e equilibrado. São alheios às mudanças repentinas de humor, à impulsividade e à emotividade excessiva, embora sejam muito afetuosos com a família, demonstrem muito amor e devoção. Por outro lado, apesar das qualidades acima, firmeza de caráter e consciência da própria força e poder, às vezes tornam o cão muito independente, principalmente se o dono tiver um caráter brando e indeciso. Afinal, esse animal de estimação precisa de uma mão firme e confiante.
O Mastim Napolitano é uma raça perfeita para guardar sua propriedade, seja um apartamento ou uma casa particular. Por um lado, não gostam muito de latir e o fazem com certa moderação, por outro lado, o cão nunca deixará intrusos entrarem em seu território.